多肽合成是什么?多肽合成技术原理、多肽合成方法解读

国肽生物是一家专业从事多肽合成产品的研发、生产和销售以及多肽合成技术转让的高新技术企业。BP公司成立之初,便成功收购了国内几家多肽、抗体公司,是目前国内的专业多肽合成、抗体制备、蛋白表达的规模型生产企业。国肽生物专长于荧光标记肽、多肽合成、同位素标记肽、人工胰岛素、药物肽、化妆品肽、多肽合成技术原理、多肽合成方法解读、长肽困难肽等产品的合成与研发,致力于学术水平的科研提升,搭建学术交流平台,促进前沿、专业的学术知识推广,推动多肽在生物医学材料等领域的研究与应用

我们拥有成熟的多肽合成纯化方法,利用SPPS方法和液相合成方法为客户提供高品质多肽。我们的服务特点是:

1. 纯度:我们提供粗品肽和纯度纯度为70%,75%,80%,85%,90%,95%,98%,99%的纯品多肽。

2.脱盐和转盐:根据客户要求,我们可以对多肽进行脱TFA盐处理,也可以转为醋酸盐。

3.交货期限:30个氨基酸之内,一般2-3周,最快1-2周。

4.质量控制:每条多肽都免费提供合格的HPLC,MS和COA文件。

5.售后服务:1-2周内可以提出异议,我们免费复测,不合格免费退货,1-3个月内使用不合格可以免费提供复测,样品免费保存3个月。

供应各种修饰型多肽。

1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修饰的多肽:我们提供单磷酸化和多磷酸化多肽服务,目前我们已经能够提供四个磷酸化位点修饰的多肽。

2.5(6)-FAM,FITC,CY5,RhodamineB,PNA,EDNAS/dabcyl等荧光标记修饰的多肽:荧光标记修饰多肽技术是我们国肽生物的代表性多肽合成技术,我们的这项技术已经相当成熟。

3.生物素Biotin,Lys(Biotin)修饰的多肽:生物素是维生素B2的组成部分,Biotin,Lys(Biotin)修饰的多肽也是客户经常定制的多肽。我们提供生物素修饰的多肽已经有将近100%的成功率。

4.含有一对或多对二硫键修饰的多肽:二硫键在蛋白质的结构稳定中起到重要作用,目前我们已经能够为客户提供四对二硫键修饰的多肽。

5.含有同位素C13,N15修饰的多肽:同位素标记的多肽主要应用于医学和生物学领域,通常价格较高,为了满足客户需要,我们接受微克级的同位素多肽定制。

6.含有特殊氨基酸修饰的多肽:例如,D型氨基酸,氨基酸衍生物,脂肪族羧酸等等,都在我们接受的定制范围内。

国肽生物提供150个氨基酸以内的长肽合成服务。

多肽合成过程中,肽链过长时,经常会出现缺残基,氨基酸缩合困难等情况,基于这些现象,我们开发了三种有效提高反应成功率的方案:

1. 微波合成法:对于合成过程中出现的一些难以缩合的氨基酸,我们采用微波法进行合成,该方法效果显著,并且大大缩短了反应时间。

2. 片段合成法:当某些多肽用常规合成方法合成困难,我们也会采用将多肽中某一段的某几个氨基酸缩合之后作为一个整体缩合到肽链上去,这种方法也能够解决许多合成中存在的问题。

3.酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是将固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之间的化学选择性反应形成酰胺键而实现多肽的连接,该方法根据肽链中Cys的位置,将整条肽链分成多条序列分别合成,最终经过液相缩合反应得到目标肽,显著地提高了最终产物纯度,广泛适用于含有Cys的长链多肽的合成。

国肽生物拥有成熟的长肽合成工艺,能够根据客户定制的多肽序列,快速有效地设计合成方案并迅速开始合成,更快更好的为客户提供所需的服务是我们不变的坚持。

多肽定制种类

一、特殊类别多肽:订书肽、同位素标记多肽、磷酸肽、环肽、二硫键多肽、糖肽、药物肽、化妆品肽等

二、修饰肽:磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC、CMK、FMK等)、目录肽、偶联蛋白(KLH、BSA、OVA等)、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、RGD环肽等

三、特殊氨基酸多肽:可以将种类繁多的非天然氨基酸合成到多肽上。

四、合成方法:多肽固相合成、多肽液相合成、点击化学、一锅法合成等

五、多肽项目外包服务:您提供实验路线或者产品大致结构,公司专员设计好后,遵循先小试后放大的原则,给您生产多肽产品。

多肽产物纯度选择

常见的质谱级多肽纯度,一般要求>95%

用于抗体筛选纯度,一般>85%即可

NMR和结晶试验中,纯度一般>98%

粗品肽,一般>50%即可用于多肽筛选

服务内容

标准肽:链长至 150个氨基酸,毫克至克级,纯度最高可达99%。

不同纯度范围:粗肽、脱盐、>75% 、> 85% 、>90%、>95%、>98%、>99%。

常规修饰肽:乙酰化,酰胺化,生物素标记肽,磷酸化肽,D型氨基酸修饰肽等。

特殊修饰肽:磺酸化肽(Sulfated-tyrosine),环肽(二硫键环化,首尾环化),荧光标记肽(FITC,Dabcyl/Edans,Dansyl,FAM,Abz/Dnp,Rhodamine等),甲基化多肽(Lys(Me2),Lys(Me),Lys(Me3),Arg(Me),Arg(Me2) -Symetrical,Arg(Me2) –Asymetrical),同位素标记肽(Heavy Isotope Labeled Peptides)、拟肽(peptoid)和点击化学用多肽(Peptides for Click Chemistry)。

药用肽,大批量肽。

协助客户建立科研肽库。

抗原多肽及其与蛋白的交联:KLH,BSA, OVA, HEL。

服务流程

确定合成序列,我们国肽生物将在12小时内容提供准确报价。

根据合同内容,在规定时间内交货,货到付款。

对于合成的每条多肽,将免费提供HPLC和MS检测报告。

产品以冻干粉状态包装,以快递方式送达客户手中。

国肽生物官网:www.bankpeptide.com

销售邮箱:sales@bankpeptide.com

电话:0551-62626599

地址:合肥市高新区香樟大道168号科技实业园C6#4层

多肽合成又叫肽链合成,是一个固相合成次第普通从N端(氨基端)向C端(羧基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中中止的称为液相合成法。多肽的合成主要分为两条途径:化学合成多肽和生物合成多肽。

    多肽合成的原理

    多肽合成就是如何把各种氨基酸单位按照自然物的氨基酸排列次第和衔接方式衔接起来。由于氨基酸在中性条件下是以分子内的两性离子方式(H3+NCH(R)COO-)存在,因此,氨基酸之间直接缩合构成酰胺键的反响在普通条件下是难于中止的。

    氨基酸酯的反响活性较高。在100℃下加热或者室温下长时间放置都能聚合生成肽酯,但反响并没有定向性,两种氨基酸a1和a2的酯在聚合时将生成a1a2…、a1a1…、a2a1…等各种恣意次第的混合物。

    为了得到具有特定次第的合成多肽,采用恣意聚合的方法是行不通的,而只能采用逐步缩合的定向多肽合成方法。普通是如下式所示,即先将不需求反响的氨基或羧基用恰当的基团暂时维护起来,然后再中止衔接反响,以保证多肽合成的定向中止。

    式中的X和Q分别为氨基和羧基的维护基,它不只可以防止乱接副反响的发作,还具有能消弭氨基酸的两性离子方式,并使之易溶于有机溶剂的作用。

    Q在有的情况下也可以不是共价衔接的基团,而是由有机强碱(如三乙胺)同氨基酸的羧基氢离子组成的有机阳离子。Y为一强的吸电子基团,它能使羧基活化,而有利于另一氨基酸的自由氨基,对其活化羧基的羧基碳原子中止亲核进攻生成酰胺键。

    由此所得的衔接产物是N端和C端都带有维护基的维护肽,要脱去维护基后才干得到自由的肽。假设肽链不是到此为止,而是还需求从N端或C端延长肽链的话,则可以先选择性地脱去X或Q,然后再同新的N维护氨基酸(或肽)或C维护的氨基酸(或肽)中止第二次衔接,并依次不时重复下去,直到所需求的肽链长度为止。

    关于长肽的多肽合成来说,普通有逐步增长和片段缩合两种伸长肽链的方式,前者是由起始的氨基酸(或肽)开端。每衔接一次,接长一个氨基酸,后者则是用N维护肽同C维护肽缩合来得到两者长度相加的新的长肽链。

    关于多肽合成中含有谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸等等带侧链功用团的氨基酸的肽来说,为了避免由于侧链功用团所带来的副反响,普通也需求用恰当的维护基将侧链基团暂时维护起来。

    多肽合成原理

    多肽是蛋白质水解的中间产物,是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽,同理有n个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做n肽。通常把三肽以上的叫多肽。

    多肽合成以固相合成为反应原理,在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序(序列,一般从C端-羧基端向N端-氨基端)不断添加、反应、合成,操作Z终得到多肽载体。固相合成法,大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势,现在大多采用Fmoc法合成,但对于某些短肽,tBoc因其产率高的优势仍然被很多企业所采用。

    具体合成由下列几个循环组成:

    1)去保护:Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂(piperidine)去除氨基的保护基团。

    2)激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联,形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。

    3)洗脱和脱保护:多肽从柱上洗脱下来,其保护基团被一种脱保护剂(TFA)洗脱和脱保护。

    多肽的分类

    多肽有生物活性多肽和人工合成多肽两种。

    1、生物活性肽

    生物活性肽(BioactivePeptides,BAP)是对生物机体的生命活动有益或是具有生理作用的肽类化合物,是一类相对分子质量小于6000Da,具有多种生物学功能的多肽。生物活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能,易消化吸收,有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用,是当前国际食品界Z热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。

    2、人工合成多肽

    固相多肽合成方法(SPPS),由于其合成方便,迅速,成为多肽合成的shou选方法,而且带来了多肽有机合成上的一次革命,并成为了一支独立的学科——固相有机合成,固相合成的发明同时促进了肽合成的自动化。世界上diyi台真正意义上的多肽合成仪出现在1980年代初期。

    基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上,合成一步步地进行,通常从合成链的C端氨基酸开始,接着的单个氨基酸的连接通过用DCC,混合炭酐,或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是,这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水,形成肽链,同时产出N,N?/FONT>-dyaylcohercylurea副产物。

    多肽合成方法

    1、酸酐法

    在多肽合成中,Z初考虑应用酸酐要追溯到1881年TheodorCurtius对苯甲酰基氨基乙酸合成的早期研究。从氨基乙酸银与苯甲酰氯的反应中,除获得苯甲酰氨基乙酸外,还得到了BZ-Glyn-OH(n=2-6)。早期曾认为,当用苯甲酰氯处理时,N-苯甲酰基氨基酸或N-苯甲酰基肽与苯甲酸形成了活性中间体不对称酸酐。大约在70年后,TheodorWieland利用这些发现将混合酸酐法用于现代多肽合成。

    目前,除该方法外,对称酸酐以及由氨基酸的羧基和氨基甲酸在分子内形成的N-羧基内酸酐(NCA,Leuchsanhydrides)也用肽缩合。Z后应该提到,不对称酸酐常常参与生化反应中的酰化反应。

    2、混合酸酐法

    有机羧酸和无机酸皆可用于混合酸酐的形成。然而,仅有几个得到了广泛的实际应用,多数情况下,采用氯甲酸烷基酯。过去频繁使用的氯甲酸乙酯,目前主要被氯甲酸异丁酯所替代。

    由羧基组分和氯甲酸酯起始形成的混合酸酐,其氨解反应的区域选择性依赖依赖于两个互相竞争的羰基的亲电性和(或)空间位阻。在由N保护的氨基酸羧酸盐(羧基组分)和氯甲酸烷基酯(活化组分,例如源于氯甲酸烷基酯)形成混合酸酐时,亲核试剂胺主要进攻氨基酸组分的羧基,形成预期的肽衍生物,并且释放出游离酸形式的活性成分。

    3、酰基叠氮物法

    酰基叠氮物法早在1902年就被引入到肽化学中,因此它是Z古老的缩合方法之一。在碱性水溶液中,除了与酰基叠氨缩合的游离氨基酸和肽以外,氨基酸酯可用于有机溶剂中。与其他许多缩合方法不同的是,它不需要增加辅助碱或另一等当量的氨基组分来捕获腙酸。

    长期以来,一直认为叠氮物法是唯yi不发生消旋的缩合方法,随着可选择性裂解的氨基酸保护基引入,该方法经历了一次大规模的复兴。该方法的起始原料分别是晶体状的氨基酸酰肼或肽酰肼64,通过肼解相应的酯很容易得到。

    4、对称酸酐法

    Nα-酰基氨基酸的对称酸酐是用于肽键形成的高活性中间体。与混合酸酐法多肽合成相反,它与胺亲核试剂的反应没有模棱两可的区域选择性。但肽缩合产率Z高,为50%(以羧基组分计)。

    虽然由对称酸酐氨解形成的游离Nα-酰基氨基酸可以和目标肽一起,通过饱和碳酸氢钠溶液萃取回收,但在Z初,这种方法的实用价值极低。对称酸酐可以用Nα-保护氨基酸与guang气,或方便的碳二亚胺反应制得。两当量的Nα-保护氨基酸与-当量的碳二亚胺反应有利于对称酸酐的形成,对称酸酐可以分离出来,也可不经纯化而直接用于后面的缩合反应。基于Nα-烷氧羰基氨基酸的对称酸酐对水解稳定,可采用类似上述纯化混合酸酐的方法进行纯化。

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  • 多肽 提出于 2020-11-21 09:09