GST pull down实验—gst融合蛋白沉降技术原理

GST pull down原理：先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育，这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来，即GST pulldown产物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定出未知蛋白。广泛应用于筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。

GST pull down原理-辉骏生物
先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育，这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来，即GST pulldown产物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定出未知蛋白。

GST pull down实验流程-辉骏生物

GST pull down应用-辉骏生物

筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。

几种蛋白互作实验的特点-辉骏生物

1. GST pulldown：体外表达诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况；

2. AP-MS：体内表达带标签的诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

3. TAP-MS：体内表达带双标签的诱饵蛋白，适合无IP级别抗体、但易转基因的情况；

4. CoIP：原汁原味的体内蛋白复合物分离，适合于有非常好的IP级别抗体的情况；

5. SILAC-IP：可定量鉴定分析体内蛋白复合物，适合于可传代细胞，尤其是易转基因细胞。

GST pulldown服务优势-辉骏生物

1. 近十年服务经验，众多服务案例，服务成果获得期刊认可；

2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻，擅长针对客户情况提出合适的方案建议；

3. 自有蛋白质组学平台，对微量互作蛋白的质谱鉴定有十足的把控能力，对后续的生物信息分析有独到的见解；

4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。

GST pull-down实验服务信息-辉骏生物

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

GST pull down

实验样本
诱饵蛋白的GST原核表达载体
待测蛋白抗体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、待测蛋白WB检测图
3、结果整理图
4、实验报告

3-4周

GST pull down MS

实验样本
诱饵蛋白的GST原核表达载体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告

6-7周

GST Pull down技术服务—客户发表文献

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research ( 2019，IF=9.727 ).
【研究内容】：前期研究表明，GYS2基因在HCC患者低表达，干扰GYS2基因表达导致肿瘤增殖转移。本研究通过融合表达GST-GYS2、His-p53、His-MDM2，并用GST pulldown方法，证实了MDM2与p53竞争性结合GYS2基因。相关的COIP、CHIP-qPCR等实验进一步阐明GYS2基因降低肿瘤增殖转移的机制。
使用相关技术：GST pulldown结果分析、gst pull down实验、gst pull-down技术

发表于 2021-04-15 17:00
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分类：其他组学

GST pull down实验—gst融合蛋白沉降技术原理

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